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蘇州阿爾法生物實(shí)驗(yàn)器材有限公司

17年專(zhuān)注生物實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備&耗材綜合供應(yīng)

0512-6295610418934597460

阿爾法構(gòu)建全服務(wù)鏈體系 尊享高于原廠服務(wù)的價(jià)值
Qpcr 實(shí)驗(yàn)步驟
作者： 編輯： 來(lái)源： 發(fā)布日期： 2025.05.16
信息摘要：
 朗基熒光定量 PCR 儀配套的分析軟件（具體版本以?xún)x器實(shí)際配置為準(zhǔn)）分析熒光累積數(shù)據(jù)。操作時(shí)，可先將實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)導(dǎo)入軟件，通過(guò)設(shè)置基線范圍、閾…
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前

1 -戴干凈的手套；

2 -用75%酒精清洗移液管和支架；

3 -解凍DNA樣本和所有試劑（（2×TaqMan基因表達(dá)主混合液（Applied BioSystems）、引物（10 μM）和探針（10 μM）)；

4 -輕輕混合DNA樣品，并在渦旋器上充分混合試劑。

5 -用離心機(jī)對(duì)DNA樣品和試劑進(jìn)行離心； 6 -試劑置于冰上；

7 -標(biāo)記微管，使其準(zhǔn)備好用于混合物的制備。

8 -所需設(shè)備：ABI Step One Plus實(shí)時(shí)PCR系統(tǒng)（Applied BioSystems） 9 -所需耗材：96孔板（100ul）

反應(yīng)設(shè)置

1 -根據(jù)表1中的指南，制備所需反應(yīng)次數(shù)的反應(yīng)混合物。組裝除樣品外的 所有所需組件，將等量的樣品分配到每個(gè)反應(yīng)孔中，并在最后一步向每個(gè)反應(yīng) 管中加入樣品。

表1.反應(yīng)混合物的制備。

組件

每次反應(yīng)的體積， μ l

規(guī)格

2×TaqMan基因表達(dá)Master Mix

10

1 ×

（10 μM）正向引物

1.8

900nM

（10 μM）反向引物

1.8

900nM

（10 μM）探頭

0.5

250nM

樣本DNA

4

 

無(wú)RNase/DNase的水

1.9

 

總量

20

 


2 -在旋渦中充分混合平板，然后短暫離心。

熱循環(huán)條件

對(duì)于朗基熒光定量 PCR 儀，熱循環(huán)條件補(bǔ)充如下：

溫度（℃）

時(shí)間

循環(huán)次數(shù)

50

2 min

1

95

10 min

1

95

15 sec

40

60

60 sec

40


     使用朗基熒光定量 PCR 儀配套的分析軟件（具體版本以?xún)x器實(shí)際配置為準(zhǔn)）分析熒光累積數(shù)據(jù)。操作時(shí)，可先將實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)導(dǎo)入軟件，通過(guò)設(shè)置基線范圍、閾值等參數(shù)，軟件會(huì)自動(dòng)識(shí)別熒光信號(hào)的變化趨勢(shì)，進(jìn)而完成對(duì)目標(biāo)基因的定量分析（如計(jì)算 Ct 值、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線等）。

     詳細(xì)操作可參照朗基熒光定量 PCR 儀的用戶(hù)手冊(cè)，以確保參數(shù)設(shè)置符合實(shí)驗(yàn)要求，獲得準(zhǔn)確的分析結(jié)果。


蘇州阿爾法生物實(shí)驗(yàn)器材有限公司成立于2008年，位于蘇州園區(qū)生物納米園（Biobay）A5幢301室。公司管理團(tuán)隊(duì)專(zhuān)注于科學(xué)儀器行業(yè)十四年，擁有專(zhuān)業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì)與完善的售后服務(wù)體系，目前已為300余家實(shí)驗(yàn)室提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)，涵蓋各大高校、檢測(cè)中心、科研機(jī)構(gòu)、制藥企業(yè)等13個(gè)群體。提供的實(shí)驗(yàn)室儀器主要包括振蕩培養(yǎng)箱，恒溫恒濕培養(yǎng)箱、二氧化碳培養(yǎng)箱、生化培養(yǎng)箱、霉菌培養(yǎng)箱、PCR儀，瑞寧移液器，生物反應(yīng)器，發(fā)酵罐，超低溫冰箱，液氮罐，高壓滅菌器，超純水機(jī)，天平，離心機(jī)，離心濃縮儀、研磨機(jī)、葡萄糖乳酸分析儀等。廠商企業(yè)授權(quán)包括知楚儀器、朗基、中科美菱，梅特勒，樂(lè)楓，搏旅、NEST、天根、奧盛在內(nèi)的80個(gè)余廠家。

四張拼圖

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