細(xì)胞外囊泡 (EV) 是參與細(xì)胞間通訊的膜封閉囊泡。由于遞送的 EV 貨物分子（包括 mRNA 和microRNA）會影響靶細(xì)胞基因表達(dá)、功能和表型，因此 EV 作為不同疾病的使用劑具有廣闊的前景。據(jù)報道，間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞(MSC) 分泌的 EV 對腎臟、心血管和神經(jīng)系統(tǒng)疾病均一影響作用。例如細(xì)胞移植、基于 EV 的療法被認(rèn)為更易于制造、儲存和運輸。

   評估 EV 使用效果的研究提供了可喜的結(jié)果，但從細(xì)胞培養(yǎng)基中分離 EV 仍然具有挑戰(zhàn)性。越來越多的數(shù)據(jù)表明，通常用作細(xì)胞培養(yǎng)基補(bǔ)充劑的胎牛血清(FBS) 中包含的囊泡會污染細(xì)胞分泌囊泡的純化過程。從培養(yǎng)基中省略 FBS 是克服此問題的一種選擇，但無血清培養(yǎng)條件會影響 EV 的數(shù)量和蛋白質(zhì)組成，例如神經(jīng)母細(xì)胞瘤衍生的 EV。

以前的實驗中科學(xué)家已經(jīng)從嚙齒動物原代皮層培養(yǎng)神經(jīng)元中分離出了 EV 。

  神經(jīng)元 EV 在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的細(xì)胞間通訊中具有重要功能。神經(jīng)元分泌的 EV 被其他神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞吸收，并改變受體細(xì)胞的功能。EV 已從人類誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(hiPSC) 衍生的神經(jīng)元培養(yǎng)物中分離出來。這些研究主要側(cè)重于研究 EV、它們的RNA或它們的蛋白質(zhì)貨物的疾病特異性，很少研究神經(jīng)元培養(yǎng)條件的差異。此外，一些研究使用了超速離心或基于沉淀的 EV 分離方法，導(dǎo)致純化效果也不佳。近期的一項研究表明，在超速離心純化中添加 SEC 步驟可提高 MSC 衍生 EV 的使用效果，突出了 EV 純化效率的重要性。

   該項實驗研究中，科學(xué)家們使用 UF-SEC 從 MSC 的細(xì)胞培養(yǎng)基中分離 EV。他們使用商業(yè)外泌體耗盡的 FBS (Exo-FBS) 并在非條件培養(yǎng)基中與條件培養(yǎng)基同時進(jìn)行 EV 分離和分析。 接下來，探討了 hiPSC 神經(jīng)元的不同細(xì)胞培養(yǎng)條件，以評估它們對 EV 分泌的影響。并使用納米粒子跟蹤分析 (NTA) 和盲透射電子顯微鏡分析 (TEM)評估了分泌的 EV 數(shù)。

   在本項實驗研究中，科學(xué)家們使用了一種名為UF-SEC的方法來純化來源于MSC的EV。這種方法可以從培養(yǎng)基中分離出相對高純度的EV，且產(chǎn)量較高。

   接下來，研究人員探討了hiPSC神經(jīng)元在不同細(xì)胞培養(yǎng)條件下分泌的EV數(shù)量和特征。他們發(fā)現(xiàn)，在不同的培養(yǎng)條件下，神經(jīng)元分泌的EV數(shù)量存在較大差異，并且這些EV所攜帶的RNA和蛋白質(zhì)也存在不同程度的變化。

   使用無血清培養(yǎng)基（NS）的神經(jīng)元分泌的EV數(shù)量為(2.19 ± 0.38) × 10^8 /mL，而使用有血清培養(yǎng)基（CS）的神經(jīng)元分泌的EV數(shù)量為(4.1 ± 0.52) × 10^8 /mL。

   在神經(jīng)元成熟不同階段時，分泌的EV數(shù)量也存在顯著差異。在EE期（early excitatory），分泌的EV數(shù)量為(3.48 ± 0.85) × 10^8 /mL，而在LE期（late excitatory），分泌的EV數(shù)量為(1.88 ± 0.25) × 10^8 /mL。

  刺激hiPSC神經(jīng)元（KCl處理）會導(dǎo)致其分泌更多的EV。在添加25 mM KCl的情況下，分泌的EV數(shù)量為(7.44 ± 1.15) × 10^8 /mL，而在未添加KCl的情況下，分泌的EV數(shù)量為(3.85 ± 0.37) × 10^8 /mL。

   此外，研究人員還發(fā)現(xiàn)，從不同培養(yǎng)條件下分泌的EV中所攜帶的RNA和蛋白質(zhì)也存在不同程度的變化。例如，在CS培養(yǎng)基中分泌的EV中，與代謝有關(guān)的蛋白質(zhì)數(shù)量更多，而在NS培養(yǎng)基中分泌的EV中，則檢測到更多的神經(jīng)元活動相關(guān)的蛋白質(zhì)。 同時，隨著越來越多的研究也揭示了不同細(xì)胞培養(yǎng)條件對EV數(shù)量和特征的影響?？傊珽V作為一種新型治療劑具有廣闊的應(yīng)用前景，并且在未來的研究中，我們需要進(jìn)一步深入探究其分泌機(jī)制和生物學(xué)特性。

  使用去除外泌體的培養(yǎng)基，可以避免外源性的EVs污染，提高所分離出的EVs的純度和有效性。這對于MSC研究和應(yīng)用都具有重要意義。因此，越來越多的研究者選擇使用去除外泌體的培養(yǎng)基來培養(yǎng)MSC和生產(chǎn)EVs。除了提高EVs的純度和有效性以外，去除外泌體的培養(yǎng)基還可以減少對細(xì)胞的刺激和損傷，從而提高M(jìn)SC的存活率和增殖能力。此外，去除外泌體還可以改善細(xì)胞培養(yǎng)過程中的穩(wěn)定性和可重復(fù)性，從而使得MSC的研究更加精確和可靠。

   為滿足科研和臨床的需要，蘇州阿爾法生物提供了間充質(zhì)干細(xì)胞去外泌體培養(yǎng)基，用于MSC的體外培養(yǎng)和EVs的生產(chǎn)。這種培養(yǎng)基使用商業(yè)外泌體耗盡的FBS(Exo-FBS)作為血清替代品，有效去除培養(yǎng)基中的外泌體，并提高M(jìn)SC的存活率和增殖能力，同時保證了EVs的純度和有效性。更多細(xì)胞培養(yǎng)基相關(guān)內(nèi)容進(jìn)入蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司官網(wǎng)或 0512-62956104/18934597460進(jìn)行咨詢。

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